Взятие материала и исследование на бледную трепонему. Пути инфицирования бледной трепонемой, симптомы заражения, лечение Число завитков бледной трепонемы

33. Методы обнаружения бледной спирохеты (по периодам).

Лабораторная диагностика бледной трепонемы

Для подтверждения диагноза ранних форм сифилиса (первичный и вто­ричный периоды) проводят поиск бледных трепонем в активных эле­ментах сифилиса: в первичной сифиломе, эрозированных папулах и широких кондиломах. Исследование бледных трепонем производят в их нативном состоянии, используя дня этого обычный световой мик­роскоп и затемняя поле зрения так называемым параболоид-конденсо­ром. Биологический материал наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и просматривают при увеличении J0 (объектив 90, бинокулярная насадка). В затемненном поле зрения при боковом осве­щении лампой в капле серозного экссудата, взятого из очага, выявляют различные светящиеся твердые частицы (лейкоциты, эпителиальные клетки), в том числе бледные трепонемы в виде движущейся нежной спирали или тонкого пунктира, слабо преломляющего свет.

Для диагностики заболевания используют также пунктах регионар­ного лимфатического узла, данные клинической картины, результаты сирологического исследования крови результаты обследования полового партнера (конфронтация) кдр.

Трелонему можно обнаружить с помощью ПЦР, Полимеразная цеп­ная реакция (ПЦР) - молекулярно-биологический метод, основанный на способности геномной ДНК Т. pallidum взаимодействовать с компле­ментарными праймерами к фрагменту гена мембранного иммуногена трепонемы, что вызывает амплификацию специфической ДНК. Специ­фичность метода 99%, чувствительность от 70 до 91%. ПЦР-диагностика при сифилисе в настоящее время не относится к обязательным

34. Серодиагностика сифилиса (мрс, рв, рит,риф, ифа). Ложноположительные реакции (острые, хронические). Показания для проведения мрс, рв, рит,риф, ифа.

Выделяют наиболее простую реакцию – МРС, которая используется в качестве скрининга, то есть массового обследования. Это исследование крови на сифилис, которое позволяет оценить какие-либо отклонения в организме. Очень часто случается так, что эта реакция может быть ложноположительной.

В такой ситуации требуется проведение более специфичных тестов, например, в качестве первого этапа диагностического поиска рекомендуется провести реакцию Вассермана. К тому же при различных аллергических заболеваниях может быть положительной как одна, так и другая реакция. Поэтому требуется более детальное обследование. В таких случаях рекомендуется сдать анализы на аллергию ребенку (особенно это касается детей, так у них еще несовершенна иммунная система).

2. Реакция Вассермана

Реакция Вассермана представляет собой реакцию микропреципитации. В чистом виде реакция Вассермана в настоящее время не проводится. К образцу биологического материала добавляют кардиолипин, который получен из бычьего сердца. Если человек болеет сифилисом, то происходит соединение сифилис-специфических антител с этим кардиолипином.

Реакция оценивается в плюсах – от одного до четырех. В норме она должна быть отрицательной. Однако положительная еще не говорит о том, что человек болен сифилисом. В данном случае требуется проведение более специфичных тестов.

3. РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем) основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антителами типа иммобк- лнзинов, имеющимися в сыворотке крови больных сифилисом. В каче­стве антигена для РИБТ используют взвесь бледных трепонем, полученных из тканей яичек от зараженных сифилисом кроликов с признаками си­филитического орхита. Бледные трспонемы (антиген) при контакте с сывороткой крови больного (антитело) прекращают движение, т.е. происходит их иммобилизация. Результаты реакции оценивают в про­центах: РИБТ считают положительной при иммобилизации от 51 до 100% бледных трепонем. слабоположительной - от 31 до 50%. сомни­тельной - от 21 до 30% и отрицательной - от 0 до 20%.

Иммобилизины появляются в сыворотке крови больных позднее, чем другие антитела, поэтому РИБТ становится положительной позже, чем РИФ. РИБТ наиболее специфична из существующих реакций на сифилис. Ее основное назначение - распознавание ложноположитель­ных результатов VDRL. Это особенно важно тогда, когда сифилис про­текает скрыто без наружных проявлений, но с поражением внутренних органов или нервной системы. Особенное значение имеет РИБТ для распознавания ложноположительных результатов у беременных.

4. РИФ (реакция иммунофлюоресценции) - более чувствительная реакция, бывает положительной уже в первичном серонеыггионом пери­оде сифилиса у 80% больных. По специфичности РИФ уступает РИБТ, что не пошоляет заменить ею РИБТ, хотя ее техника значительно про­ще. Реакцию ставят в нескольких модификациях: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-абс. (абсорбированная). РИФ-10 более чувствительна, а РИФ- 200 и РИФ-абс. более специфичны. Принцип реакции заключается в том, что специфический антиген (бледные грепонемы) соединяют с сывороткой крови больного (антитела) и ннтивидовой флюоресциру­ющей сывороткой (кроличья сыворотка против глобулинов четовека, соединенная с флюоресцеином - веществом, светящимся в ультрафио­летовых лучах). При положительной реакции в люминесцентном микрос ­копе можно видеть желто-зеленое свечение бледных трепонем, поскольку они оказываются окруженными флюоресцирующими антителами. Све­чение оценивают плюсами, как и при КС’Р Положительную реакцию обозначают двумя, тремя или четырьмя плюсами. При свечении I + и отсутствии свечения реакция считается отрицательной. При вто­ричном сифилисе РИФ положительна почти во всех случаях. Она всегда положительна при латентном сифилисе (99-100%), а при третичных формах и врожденном сифилисе положительна в 95-100% случаев.

Для диагностики сифилиса можно использовать и иммунофермент- ный анализ (ИФА) с реакцией микропреципитации (РПМ) или реакци­ей пассивной гемаггл юти нации (РПГА). Для клинико-серологического контроля после специфического лечения (для определения эффектив­ности терапии) допускается количественное исследование РМП (изуче­ние титра реакции в динамике).

4. Иммунодормснтный анализ (ИФА, Elisa). Принцип реакции заклю­чается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антигеном испытуемой сыво­ротки крови и выявления специфического комплекса антиген-антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом Чувствительность и специфичности ИФА аналогичны РИФ.

37. Препораты перициллина в лечении больных сифилисом, осложнения, противопоказания.

Препараты для лечения сифилиса. С 1943 г. пенициллин и его соли остаются препаратами первого выбора для регулярного лечения боль­ных сифилисом.

Чувствительность бледной тренонемы к пенициллину остается высо­кой и нет признаков ее изменений. Однако у пенициллина имеются и определенные недостатки, прежде всего повышенная чувствитель­ность некоторых больных или непереносимость, хотя зарегистриро­ванные случаи анафилаксии при введении пенициллина составляют всего 0,4%. Пенициллин в применяемых дозах не способен проникать через гематобиологические барьеры, что затрудняет его применение в обычных концентрациях для лечения больных с поздними формами сифилиса (включая поздние рецидивы), особенно при поражениях нервной системы и внутренних органов. В подобных случаях или вводят большие дозы пенициллина, или одновременное пенициллином наз­начают препараты, блокирующие его выведение почками. Возникла необходимость в создании резервных методов лечения, которые при высокой эффективности были бы свободны от недостатков, присущих пенициллину.

К настоящему времени в качестве резервных препаратов для лечения сифилиса используют антибиотики непепициллинового ряда тетрацик­лин (доксициклин), эритромицин, цефтриаксон.

Тетрациклиновые препараты эффективны при лечении раннего сифи­лиса, по их применение ограничено у беременных из-за взаимодействия с костными тканями эмбриона, которые становятся более хрупкими.

Эритромицин также достаточно эффективен при лечении первично­го и вторичного сифилиса, но может давать гепатотоксический эффект. Это ограничивает его применение улиц с патологией печени. Ни один из перечисленных препаратов не проникает через гематоэнцефаличес­кий барьер, все препараты нужно принимать долго.

В соответствии с рекомендациями ВОЗ для лечения больных сифилисом стали применять некоторые цефалоспориньц в том числе цефтизоксим и цефтриаксон. Цефтриаксон может проникать в спинно­мозговой канал, он не оказывает тератогенного действия. Это является достаточным основанием для использования цсфтриаксона при лечении больных с различными формами сифилиса, включая скрытые и поздние, а также при поражении нервной системы.

36. Основные принципы лечения больных сифилисом. Неспецифическая терапия, показания, методы.

Лечение больных сифилисом осуществляется в соответствии со специаль­ной инструкцией после установления и обязательного подтверждения диаг­ноза лабораторными исследованиями. Лечение рекомендуется начинать как можно скорее (при ранних активных формах сифилиса - в первые 24 ч). Чем раньше начато лечение, тем благоприятнее прогноз и лучше его результаты. Инструкцией предусмотрены следующие виды лечения противосифшштическими препаратами:

Специфическое лечение больных сифилисом с подтвержденным ди­агнозом.

Превентивное лечение лип, находившихся в тесном бытовом или половом контакте с больными сифилисом, проводится, если с момента контакта прошло не более 2 мес. По истечении 2 мес превентивное лече­ние не проводится, а данное лицо ежемесячно подвергается клинико­серологическому контролю п течение 4 мес.

Профилактическое лечение с целью профилактики врожденною сифилиса проводится беременным, болевшим в прошлом сифилисом, получившим полноценную терапию, но не снятым с учета, а также бере­менным, которые получили полноценное противосифилитичсское лече­ние и сняты с учета по поводу сифилиса. Новорожденным назначают профилактическое лечение, если они родились без клинических и серо­логических симптомов сифилиса от матерей, неполноценно лечивших­ся в прошлом или не успевших получить полностью профилактическое лечение во время беременности.

Пробное лечение (ex juvan (ibua ) назначают лицам, у которых кли­ническая картина позволяет подозревать поздние третичные сифилити­ческие поражения кожи, костей, суставов, внутренних органов и нерв­ной системы, а лабораторные серологические исследования (КСР, РИБТ и РИФ) не могут подтвердить или отвергнуть такой диагноз.

Больные гонооеей с невыявленными источниками заражения в слу­чае невозможности установить за ними диспансерное наблюдение (лица без определенного места жительства, работники секс-индустрии и т.д.) подлежат превентивному противосифилитическому лечению в условиях стационара Если госпитализация этих больных невозможна, превен­тивное лечение проводится амбулаторно одним из дюрантных препара­тов пенициллина.

Допускается проведение так называемого эпидемиологического лечения. При очевидных клинических симптомах сифилиса, положи­тельной мнкрореакции преципитации (VDRL, RPR) и соответствую­щем эпидемиологическом анамнезе лечение начинают немедленно, не ожидая результатов серологических реакций, подтверждающих диагноз.

За последние годы накоплен большой материал по лечению больных с различными стадиями и формами сифилиса. Основной тенденцией стало сокращение сроков лечения по всем схемам. Повышение разовых и курсовых доз антибиотиков при различных стадиях сифилиса сочета­ется с неспецифической терапией. ВОЗ рекомендует лечение свежего сифилиса с использованием бензатин-пеннциллина.

39. Клиника и диагностика острого переднего гонорейного уретрита.

Гонорейный уретрит проявляется выделением из уретры воспали­тельного экссудата и болевыми ощущениями. При остром воспалении отмечаются значительная гиперемия и отечность губок наружного отвер­стия уретры. Из уретры выделяется большое количество желтовато­зеленого или бледно-желтого гноя. Иногда незначительное жжение или зуд предшествует слизисто-гнойным выделениям. Признаки воспале­ния быстро нарастают, и через 1-2 дня формируется передний острый гонококковый уретрит, больные ощущают боль и резь при мочеиспуска­нии. При подостром переднем свежем гонококковом уретрите выделения слизисто-гнойные, необильные, воспаление губок наружного отверстия уретры выражено слабо, а субъективные ощущения незначительные. При торпидном свежем гонококковом уретрите субъективные ощущения отсутствуют, выделения скудные или почти незаметные. Губки наружного отверстия уретры не изменены. Больные в этом случае часто не обраща­ются за медицинской помощыэ и наиболее опасны в эпидемиологичес­ком отношении.

В дальнейшем при гонорее даже без лечения воспалительная реакция постепенно уменьшается, субъективные расстройства ослабевают. Урет ­рит переходит в подострую, а затем и в хроническую стадию.

Если гонококки из передней уретры попадают в заднюю уретру, воз­никает острый тотальный уретрит (уретроцистит). Больной испытывает императивные позывы на мочеиспускание, в конце которого возникает резкая боль (терминальная). Количество мочи весьма незначительно. Иногда в конце мочеиспускания появляется капелька крови (терми­нальная гематурия). В отдельных случаях при выраженном воспалении наблюдаются лихорадка, недомогание.

Диагностика как переднего, так и тотального острого гонококкового уретрита не представляет затруднений. Она основывается на данных анамнеза, типичной картине болезни, двухстаканной пробе мочи и подтверждается лабораторным обнаружением гонококков (микроско­пически и культурально). Если воспалительный процесс ограничен слизистой оболочкой передней уретры, то при последовательном вы­пускании мочи в два стакана моча в первом стакане, смывая из уретры гной, будет мутной, а во втором - прозрачной.

При тотальном уретрите моча в двух стаканах будет мутной, так как гной из задней уретры из-за несостоятельности внутреннего сфинктера затекает в мочевой пузырь (тотальная пиурия).

Treponema – род бактерий, объединяющий многочисленные виды, из которых самым распространенным является возбудитель сифилиса – treponema pallidum (трепонема паллидум, бледная трепонема). В этот род также входят возбудители фрамбезии и пинты. Treponema pallidum является спиралевидной бактерией семейства Spirochaetiaceae (спирохеты), вызывающей инфекционное венерическое заболевание - . Патология отличается волнообразным течением и проявляется характерной клиникой. Заражение происходит преимущественно половым путем, благодаря чему сифилис относится к ИППП.

В настоящее время в мире регистрируется огромное количество венерических заболеваний, которые представляют реальную угрозу для жизни человека. Treponema pallidum – опасный микроб, вызывающий системное заболевание, поражающее кожу и внутренние органы. На месте внедрения спирохеты образуется первичный патологический очаг – . Затем на коже появляются сифилитические высыпания, увеличиваются регионарные лимфатические узлы. При отсутствии адекватной терапии поражаются внутренние органы, развиваются необратимые изменения, возможен летальный исход.

Treponema pallidum

Морфология

Treponema pallidum - грамотрицательный микроорганизм, имеющий форму тонкой спирали, скрученной в 8-12 мелких завитков. Свое название бледная трепонема получила благодаря способности не воспринимать обычные лабораторные красители.

Спирохета является строгим анаэробом, хорошо растущим в бескислородной среде. Но не смотря на это, жизнеспособность бактерий сохраняется на окружающих бытовых предметах в течение 3 и более дней. Трепонема имеет жгутики и фибриллы. Благодаря им и собственным сокращениям клетки бактерия совершает поступательные, вращательные, сгибательные, волнообразные, винтообразные и контрактильные движения. Она быстро проникает в живые клетки и стремительно размножается в них поперечным делением.

Бледная трепонема имеет трехслойную клеточную стенку, цитоплазму и органеллы: рибосомы, мезосомы, вакуоли. Рибосомы синтезируют белки, а мезосомы обеспечивают дыхание и обмен веществ. Ферменты и антигены содержатся в цитоплазматической мембране. Тело бактерии покрыто слизистой бесструктурной капсулой, выполняющей защитную функцию.

Физические свойства

Микробы устойчивы к низким температурам и чувствительны к высоким. При нагревании они гибнут в течение 20 минут, при высыхании в течение 15 минут, а при кипячении – мгновенно. Антисептики и дезинфектанты быстро уничтожают бледную трепонему. Губительное действие на бактерию оказывают: ультрафиолет, свет, спирт, щелочи, уксус, мышьяк, ртуть, хлорсодержащие дезинфицирующие средства. Treponema pallidum устойчива к некоторым антибиотикам.

Бледная трепонема проявляет свои патогенные свойства во влажной и теплой среде. В организме человека излюбленным местом размножения являются лимфатические узлы. На стадии вторичного сифилиса микробы концентрируются в крови и проявляют свои патогенные свойства.

Культуральные свойства

Трепонема паллидум не растет на искусственных питательных средах, в культуре клеток и куриных эмбрионах. Ее культивируют в яичках кролика. В этих клетках микроб хорошо растет и размножается, полностью сохраняя свои свойства и вызывая у животного орхит.

Существуют обогащенные питательные среды, предназначенные для выделения чистой культуры. Микробы на них растут под толстым слоем вазелинового масла. Таким способом получают антитела, необходимые для постановки специфических реакций на сифилис.

Трепонемы растут на кровяном или сывороточном агаре в бескислородной среде. При этом они теряют свои патогенные свойства, но сохраняют антигенные. Патогенные трепонемы способны ферментировать маннит, утилизировать лактат и образовывать специфические метаболиты.

Патогенность

К факторам и компонентам патогенности и вирулентности бактерий относятся:

1. Белки-адгезины, обеспечивающие фиксацию микроба на клетке-хозяина,
2. Миофибриллы, способствующие глубокому проникновению в организм и миграции бактерии в теле хозяина,
3. Образование L-форм,
4. Липополисахариды наружной мембраны,
5. Фрагменты болезнетворной клетки, проникающие вглубь тканей,
6. Способность внедряться в межклеточные соединения эндотелия,
7. Антигенная изменчивость.

Трепонема паллидум оказывает прямое токсическое действие на синтез макромолекул – ДНК, РНК и белков. Антигены Т. pallidum используются в реакции Вассермана для серодиагностики сифилиса. При неблагоприятных условиях спирохета трансформируется в L-формы, которые обеспечивают ее устойчивость к антибактериальным средствам и антителам.

Эпидемиология

Сифилис - строгий антропоноз. Инфекция персистирует только в организме человека, который является ее естественным резервуаром в природе. Входными воротами инфекции являются: поврежденный плоскоклеточный или цилиндрический эпителий ротовой полости или половых органов.

Распространение инфекционных агентов происходит:

• Половым путем во время полового акта через сперму,
• Бытовым путем через белье, средства гигиены, косметические принадлежности, при поцелуе,
• Вертикальным путем от инфицированной матери ребенку во время родов, а также через молоко при кормлении грудью,
• Трансплацентарным путем на поздних сроках беременности,
• Гематогенным путем при прямом переливании крови, во время операций, при использовании общего шприца у наркоманов.

Риск инфицирования повышен у медицинских работников – стоматологов, косметологов. Заражение происходит при проведении медицинских манипуляций и процедур, повреждающих кожные покровы. Заражаются treponema pallidum лица, ведущие беспорядочную половую жизнь, имеющие несколько половых партнеров, пренебрегающие барьерными методами контрацепции. Для того, чтобы произошло инфицирование, у больного в секрете должно быть много бактерий, а у партнера - должны присутствовать повреждения на слизистой оболочке.

первые проявления болезни

Больной максимально заразен в периоды первичного и вторичного сифилиса, когда на коже и слизистой половых органов появляются первые признаки болезни. В это время в окружающую среду выделяется много спирохет.

В настоящее время регистрируется большое число больных с экстрагенитальными шанкрами, расположенными на слизистой рта, глотки, ануса. У них высыпания локализуются на лице, сифилиды – на ладонях и подошвах. Третичный период сифилиса в последнее время развивается в очень редких случаях и протекает практически бессимптомно.

Симптоматика

Инкубация характеризуется миграцией бактерий по лимфатическим и кровеносным сосудам и их активным размножением в лимфоузлах. Продолжительность периода - от 3 недель до 3 месяцев.

Врожденный сифилис развивается в результате внутриутробного заражения плода. Эта тяжелейшая патология проявляется характерной триадой симптомов у ребенка: врожденной глухотой, кератитом, гетчинсоновыми зубами.

Диагностика

Диагностика сифилиса включает опрос и осмотр пациента, сбор анамнестических сведений, а также клинические испытания, которые играют важную роль в обнаружении бледной трепонемы и постановке диагноза.

• Микроскопическое исследование биоматериала. Бактериоскопию мазка-отпечатка шанкра или биоптата лимфатического узла проводят в первые 4 недели болезни. Для получения качественного мазка поверхность эрозии и язвы обрабатывают физраствором, производят соскоб и из полученного материала готовят препарат для микроскопии. Мазок окрашивают по Романовскому-Гимзе. Трепонема имеет бледно-розовый цвет. Живые микробы в неокрашенном и нефиксированном мазке не видны в световой микроскоп. Для их обнаружения применяют темнопольную или фазовоконтрастную микроскопию. Для проведения темнопольной микроскопии берут материал из сифилитической язвы и исследуют его в специальном аппарате. Бактерия обладает способностью преломлять свет: в микроскопе она имеет вид белой спиралевидной полоски. Для обнаружения трепонем в различных клинических материалах применяется также люминесцентная микроскопия.

Лечение

Лечением сифилиса занимается врач-дерматовенеролог. Он подбирает терапию индивидуально с учетом стадии, клиники болезни и особенностей пациента. Комплексное лечение способствует полному выздоровлению, которое должно подтверждаться лабораторно.

Лечение сифилиса этиотропное, направленное на уничтожение возбудителя – treponema pallidum. Больным назначают большие дозы антибиотиков, к которым чувствителен данный микроб. Обычно используют пенициллины «Бензилпенициллин», тетрациклины «Доксициклин», макролиды «Кларитромицин», «Сумамед», цефалоспорины «Цефазолин», фторхинолоны «Ципрофлоксацин». Антибактериальную терапию продолжают 2 месяца. Лечение беременных женщин проводят также.

Иммуностимуляция, витаминотерапия, физиопроцедуры дополняют этиотропное лечение и помогают больным восстановиться после болезни. Превентивная терапия проводится половому партнеру и лицам, контактировавшим с больным.

Видео: дерматовенеролог о лечении сифилиса

Профилактика

Профилактические мероприятия заключаются в соблюдении личной гигиены, использовании отдельного белья и посуды, индивидуальных косметических средств. Рекомендуется сразу после незащищенного полового акта обработать раствором хлоргексидина или альбуцида половые органы или другие части тела, с которыми произошел контакт. Эти средства необходимо иметь в домашней аптечке.

С профилактической целью обследуют:

1. Доноров,
2. Беременных женщин,
3. Работников детских садов, школ, общепита и лечебно-профилактических учреждений,
4. Больных, поступающих на стационарное лечение.

Современная противомикробная терапия позволяет избавиться от патологии и делает прогноз заболевания благоприятным. Только врач-дерматовенеролог сможет подобрать правильное и достаточное лечение, соответствующее стадии болезни. Заниматься самолечением сифилиса категорически запрещено. Не до конца излеченная патология может перейти в хроническую форму. Такой больной опасен для окружающих лиц.

Сифилис – социальный недуг, к лечению которого нужно подходить серьезно и ответственно.

Видео: сифилис в программе “Здоровье”

Характеризующийся первичным аффектом (твердый шанкр), высыпаниями на коже и слизистых оболочках с последующим поражением различных органов и систем. Заражение происходит половым путем, реже - контактнобытовым, трансплацентарным путями и через кровь. Заболевания протекают циклически: первичный сифилис , вторичный, третичный. Иммунитет после перенесенной болезни не развивается. Антитела являются свидетелями процесса.

Таблица 3.42. Патогенные представители рода Treponema

Рис. 3.101 . Рисунок препарата Treponema pallidum в мазке из твердого шанкра. Импрегнация спирохет серебром

Рис . 3.100 . Чистая культура Mobiluncus curtisii (Falcivibrium grandis). Окраска по Граму.

Мобилункусы - тонкие изогнутые палочки, часто с конусовидными концами (0,4-0,6 х 1,2-4,0 мкм). Форма и величина бактерий изменчивы. Грамотрицательны или грамвариабельны, однако клеточная стенка имеет строение грамположительных бактерий. Подвижны. Облигатные неспорообразующие анаэробы. Культивируются с трудом

Т. pallidum - тонкие штопорообразно закрученные нити (0,18 х 6-20 мкм) с 8-12 мелкими завитками. По Романовскому-Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет. Слабо окрашиваются анилиновыми красителями, окрашиваются серебрением. Хорошо видны при темнопольной и фазовоконтрастной микроскопии. Имеют 8-12 периплазматических жгутиков. Движения - поступательные, вращательные и маятникообразные. Анаэробы или микроаэрофилы. В организме возбудитель сифилиса может инцистироваться и образовывать L-формы. Антигены - специфический термолабильный белковый и неспецифический липоидный, сходный с кардиолипином, экстрагируемым из сердца быка.

Микробиологическая диагностика. Бактериоскопия в темном поле: материал для исследования - отделяемое твердого шанкра, пунктаты лимфатических узлов, материал из высыпаний кожного покрова. Иммунофлюоресценция (РИФ) мазка, окрашенного иммунной антитрепонемной сывороткой, меченной флюорохромом. Серодиагностика: а) с кардиолипиновым антигеном; б) с трепонемным антигеном. Для ориентировочной диагностики ставят: реакцию VDRL (Venereal disease research laboratory) - микропреципитацию кардиолипинового антигена с сывороткой крови больного (микрореакция преципитации), реакцию Вассермана (РСК). Окончательный диагноз ставят: на основании РИФ с тканевым штаммом Т. pallidum (непрямой метод), ИФА и РИБТ (реакция иммобилизации бледных трепонем) для выявления антител. Применяют также РПГА с трепонемным эритроцитарным диагностикумом.

Рис. 3.102 . T . pallidum в темном поле

Возбудитель эндемического сифилиса (Treponema pallidum, подвид endemicum)

Treponema pallidum подвид endemicum (T. bejel) - тонкие извитые бактерии (спирохеты), относящиеся к роду Treponema. Вызывает беджель, или эндемический сифилис (невенерический сифилис детского возраста), сопровождающийся сыпью на коже и слизистых оболочках, развитием кондилом и гуммозных проявлений. Морфологически неотличим от бледной трепонемы (Т. pallidum). Путь передачи - контактно-бытовой.

Микробиологическая диагностика . Бактериоскопический метод - обнаружение возбудителя в мазках из экссудата, регионарных лимфатических узлов, биоптатов очагов поражения. Серологический метод сходен с серологической диагностикой сифилиса, однако титры антител ниже, чем при сифилисе.

Для подтверждения диагноза «сифилис» необходимо ориентироваться не только на клинические данные – объективные симптомы болезни – наличие характерного шанкра в первичном периоде, пятнистых высыпаний во вторичном или гуммозной и бугорковой сыпи при позднем сифилисе. С этой целью используются методы лабораторной диагностики сифилиса, наиболее часто применяемые из которых – микроскопия, культуральное исследование материала от пациента, серологические пробы и гистологическое исследование образцов биологических тканей. В данной статье будет рассмотрена микроскопическая диагностика сифилиса.

Микроорганизмы – спирохеты – в организме больного человека находятся в межтканевом пространстве, между соединительнотканными волокнами, окружают русла лимфатических и кровеносных сосудов. Чтобы точно определить наличие возбудителя сифилиса, необходимо забрать материал для исследования именно оттуда. Конечно, забирать материал имеет смысл только элементов сыпи (в особенности с эрозий и язвочек), с поверхности шанкров и со слизистых оболочек гениталий, ротовой полости и прямой кишки. Кроме того, существуют и альтернативные способы, например, пункция лимфатических узлов.

Как правильно забрать материал для исследования?

Чтобы мазок на сифилис получился удачным, перед взятием диагностического материала с поверхности язвы или эрозии нужно убрать все лишние загрязнения с помощью марлевого тампона, пропитанного физиологическим раствором. После подсушивания поверхности элемента на его поверхность начинает просачиваться жидкость, в большом количестве содержащая возбудителя болезни. Ускорить процесс можно с помощью мягкого надавливания на элемент (разумеется, в резиновых перчатках). После этого с помощью предметного стекла изготовляется мазок на сифилис, который после обработки микроскопируется. Чтобы получить материал из неподверженных эрозии высыпаний, используется метод поскабливания их скальпелем или стерильной бритвой.

Темнопольная микроскопия

Одним из наиболее перспективных и дешевых методов диагностики сифилиса является микроскопия трепонем в темном поле. При этом препарат не высушивается, исследование проводят в капле обычного изотонического раствора соли. На предметное стекло направляют узким пучком яркий свет (его получают с помощью специального прибора – конденсатора). Свет при этом падает на препарат практически сбоку, в объективе при этом видно темное поле. Однако микробные тела, находящиеся в препарате, преломляют и отражают свет – в результате возникает крайне интересный оптический эффект (основанный на феномене Тиндаля) – трепонемы начинают выглядеть как светящиеся подвижные спирали с несколькими завитками.

Исследование по методу Романовскому – Гимзе

Данный способ (в отличие от окраски по Граму) позволяет получить хорошо различимое изображение микробного тела при микроскопии – это один из наиболее достоверных методов диагностики сифилиса. Исследование проводится следующим образом: полученный мазок на сифилис фиксируют в реактиве Никифорова (смесь равных долей этилового спирта и эфира), затем окрашивают с помощью пигмента Романовского – Гимзе в течение 2-5 часов. После прокрашивания мазка его сушат при температуре 25-28 градусов и исследуют под микроскопом в иммерсионной среде (специальном иммерсионном масле, практически не преломляющем лучи света). В результате окраски по Романовскому – Гимзе возбудитель сифилиса приобретает розовый оттенок цвета, в то время как остальные спирохеты окрашиваются в синие и фиолетовые тона.

Способ Морозова (импрегнация трепонем серебром)

Пожалуй, один из наиболее быстрых методов микроскопической диагностики сифилиса. Для своего осуществления требует нескольких реактивов:

• первый – уксусная кислота (охлажденная), формалин 40% и 100 мл стерильной воды;
• второй – танин, сто мл карболовой кислоты и столько же дистиллированной воды;
• третий – сто мл раствора нитрата серебра в воде.

Импрегнацию трепонем серебром (серебрение по Морозову) проводят следующим образом: мазок высушивают, заливают первым реактивом на одну минуту, после чего предметное стекло промывают водой. Затем наступает очередь второго реактива – стекло при этом нагревают на 1 минуту в пламени спиртовки (умеренно). После промывания стекло вновь нагревают до окраски мазка в коричневый цвет. Затем снова следует тщательное отмывание, сушка и исследование в иммерсионной среде. Бледные трепонемы после серебрения по Морозову выглядят черными или темно-коричневыми неподвижными микробными телами. Все морфологические свойства их сохраняются в достаточной степени для достоверной идентификации.

Мир микроорганизмов чрезвычайно разнообразен и систематизирован учёными-исследователями. Изучение живого микромира активно велось в прошлом столетии. Однако, многие болезни до конца не изучены и в нынешнем веке.

Так, например, до сих пор не существует единого мнения по поводу происхождения сифилиса. Эта «французская болезнь», как наиболее древнее инфекционное заболевание человечества, по утверждению М. В. Милича, возникла на Земле одновременно с появлением человека.

К слову, М.В. Милич - ведущий сифилидолог страны периода 60-80-х годов, автора многочисленных книг и монографий, посвященных сифилису.

Официально открытие возбудителя сифилиса относится к 1905 году. Немецкие микробиологи Ф. Шаудин и Э. Гофман определили ряд морфологических, культуральных, биохимических свойств бледной трепонемы, а также некоторые особенности данного микроорганизма, положенные в основу таксономии.

В данной статье подробно разберем особенности строения, антигенную структуру, биохимические и физиологические свойства инфекционного агента, вызывающего сифилис.

Итак, единственным возбудителем сифилиса человека является Treponema pallidum (бледная трепонема). Она относится к порядку Spirochaetales типа Spirochaetes.

Показать всё

1. Морфология Treponema pallidum

Клетки бледных трепонем имеют длину 6-15 мкм, ширину 0,1-0,2 мкм, представляют собой протоплазматический цилиндр (цитоплазма, окружённая цитоплазматической мембраной), скрученный в спираль. Иногда клетка микроорганизма напоминает штопорообразную тонкую нить.



Рисунок 1 - Строение бледной трепонемы. OM, наружная мембрана; Ef (эндофлагелла или периплазматические жгутики); LP 1, 2, липопротеины; Pg - пептидогликан; CM - цитоплазматическая мембрана. (Из Cox DL, Chang P, McDowall AW и Radolf JD: Наружная мембрана, а не оболочка белков хозяина, ограничивает антигенность вирулентной трепонемы паллидум. Infect Immun 60: 1076)

Число завитков - от 8 до 14 штук. Завитки, одинаковые по размерам, сохраняются при любых движениях клетки, даже при движении трепонемы вдоль или между других клеток, например, форменных элементов крови.



Рисунок 2 - Электронная микрофотография Treponema pallidum. (From Fitzgerald TJ, Cleveland P, Johnson RC et al: Сканирующая электронная микроскопия Treponema pallidum (штамм Nichols), прикрепленная к культивируемым клеткам млекопитающих. J Bacteriol 130: 1333, 1977.)

С полюсов клетки, между оболочкой и цитоплазмой располагаются фибриллы. Одна часть фибриллы зафиксирована, вторая часть остаётся свободной. Фибриллы образуют двигательный аппарат трепонемы паллидум, позволяющий осуществлять несколько типов движения в жидкой среде:

1. 1 Перемещение.
2. 2 Вращение вдоль оси.
3. 3 Сгибание.

Treponema pallidum является грамотрицательным микроорганизмом. Однако, по Грамму не окрашивается, так как имеет в своём составе гидрофобные частицы, не восприимчивые к анилиновым красителям.

При окраске по Романовскому-Гимзе приобретает слабо – розовый цвет. Эта особенность послужила основанием для видового названия возбудителя сифилиса.

Treponema pallidum subsp pallidum - это требовательный к условиям окружающей среды микроорганизм, который имеет узкие оптимальные диапазоны pH (7,2-7,4), Eh (-230-240 мВ) и температуру (30-37°C). Трепонемы быстро инактивируются слабым теплом, холодом, высушиванием и большинством дезинфицирующих средств.

Традиционно трепонемы паллидум считались строгими анаэробами, но теперь они известны как микроаэрофильные бактерии.

2. Культуральные и биохимические свойства

Несмотря на интенсивные усилия в течение последних 75 лет, T pallidum pallidum не были успешно культивированы in vitro. Жизнеспособные микроорганизмы могут сохраняться в течение 18-21 дней в комплексных средах, а ограниченная репликация была получена совместным культивированием с клетками культуры ткани. Другие три патогенных вида трепонем также не были успешно выращены in vitro.

При культивации бледная трепонема теряет свою патогенность, но, тем не менее, сохраняет некоторые антигенные свойства (эту особенность используют для постановки реакции Вассермана).

Культуру, в основном, культивируют в тестикулах кроликов. В ткани тестикул трепонема паллидум размножается, вызывая орхит у многострадальных животных.

Размножается Т. pallidum бинарным поперечным делением при температуре около 37˚С. Время генерации in vivo относительно велико (30 часов).

Трепонемы малоустойчивы во внешней среде.

1. 1 Вне человеческого организма живут несколько минут, после высыхания погибают. Так, при температуре 40˚С трепонемы погибают в течение нескольких часов, при температуре свыше 50˚С - в течение 15 минут.
2. 2 При неблагоприятных условиях микроорганизм образует L–формы, а также цисты, которые, в свою очередь, способны, к образованию вновь спиралевидных форм.

По типу метаболизма Т. pallidum является хемоорганогетеротрофом. Это означает, что в качестве источника энергии для жизнедеятельности бледная трепонема использует органические вещества и энергию химических связей.

Ввиду неспособности к существованию Т. pallidum in vitro биохимические свойства изучены не достаточно хорошо.

3. Антигенная структура

Т. pallidum имеет мало изученную антигенную структуру. Она представлена специфическим термолабильным протеиновым антигеном, неспецифическим липоидным антигеном, а также антигеном полисахаридной природы.

Проще говоря, антигены бледной трепонемы – это преимущественно белки, липиды и полисахариды наружной мембраны клетки.

Важную роль играет липополисахарид (ЛПС) клеточной стенки бактерии. Он выполняет антигенную и токсическую функции, являясь эндотоксином бледной трепонемы.

Липоидный антиген сходен с тканевым экстрактом бычьего сердца – кардиолипином.

4. Факторы патогенности

Как и биохимические свойства, факторы патогенности трепонем изучены не достаточно хорошо.

После попадания в макроорганизм Т. pallidum высвобождает специфические белки, липополипротеины и липополисахариды, проявляющие токсические свойства после ее гибели.

Липополипротеины участвуют в активации иммунной системы, а протеины сходны по отдельным свойствам с бактериальными гемолизинами.

К факторам патогенности бледной трепонемы относят способность высвобождать эндотоксины и липидные антигены по все видимости, из липидов митохондриальных мембран, обладающие свойством аутоантигенов.

Т. pallidum, являясь грамотрицательной бактерией, не продуцирует экзотоксины, однако обладает токсической активностью в отношении некоторых клеток, например, нейробластов.

5. Виды иммунитета

В ответ на внедрение возбудителя сифилиса в организм человека возникает клеточный и гуморальный иммунный ответ.

Клеточный иммунитет связан с фиксацией бледной трепонемы к клеткам органов и тканей и последующей активацией макрофагов, Т-лимфоцитов. При этом из организма человека возбудитель сифилиса не элиминируется.

Гуморальный иммунитет характеризуется образованием специфических иммуноглобулинов. На ранних этапах инфекции в организме человека образуются IgM. По мере прогрессирования инфекции активируется синтез IgG. IgA синтезируется в малых количествах. Вопросы участия и синтеза IgD и IgE не достаточно хорошо изучены.

6. Чувствительность к антибактериальным препаратам

Возбудитель сифилиса чувствителен практически ко всем антибиотикам, но к препаратам выбора относятся пенициллины.

В основе клеточной стенки бледной трепонемы лежит пептидогликан, выполняющий защитную функцию. Этот пептидогликан является «мишенью» для основного антибактериального препарата, предназначенного для лечения сифилиса – пенициллина. Антибиотики группы пенициллинов разрывают тетрапептидные связи пептидогликана.

При воздействии антибиотика на растущую бледную трепонему (возможно, при длительном воздействии) образуется L-форма бактерии. Такая форма лишена клеточной стенки, но всё ещё способна к размножению.

Определение чувствительности бледной трепонемы к антибактериальным препаратам не проводится.

7. Лабораторная диагностика сифилиса

Лабораторные методы диагностики сифилиса условно можно разделить на 2 группы:

1. 1 Выявление самого возбудителя заболевания из биологических препаратов (содержимое шанкра, гнойное отделяемое папул, пунктаты из лимфатических узлов).
2. 2 Серологические реакции.

Серологические реакции используются как для верификации диагноза, так и для оценки эффективности терапии сифилиса. Особенность серологии сифилиса сводится к отсутствию положительных результатов анализов на раннем этапе заболевания.

Объясняется это достаточно просто. Так, инкубационный период сифилиса в среднем составляет 3-5 недель. Было замечено, что у асоциальных лиц, злоупотребляющих спиртным, а также у лиц с туберкулёзом и ВИЧ-инфекцией инкубационный период отличается от средних показателей в сторону уменьшения (2 недели).

Инкубационный период увеличивается на фоне приёма различных антибактериальных препаратов (до 6 месяцев).

На протяжении этого времени концентрация антител не успевает достигнуть диагностического титра. Однако, у инфицированного человека могут присутствовать клинические симптомы. Такой сифилис называется серонегативным.

Серопозитивным называют сифилис с яркой клинической картиной и присутствием в крови диагностического титра антитела (то есть положительный результат серологических реакций). При отсутствии лечения серопозитивный сифилис перетекает во вторичный сифилис, длящийся несколько лет.

8. Выявление T. pallidum в субстрате

8.1. Методика исследования Т. pallidum в «тёмном поле»

Популярным методом диагностики является обнаружение бледной трепонемы в тёмном поле микроскопа. Этот метод позволяет наблюдать за трепонемой, учитывать особенности её морфологии и движения.

Материал для исследования забирают с твердого шанкра или с эрозий гранулём и папул. Осторожно захватывают предварительно очищенный материал петлей, смешивают с каплей физиологического раствора и наносят на предметное стекло.

Живой материал изучают в тёмном поле микроскопа. Для этого применяют специальный конденсор, позволяющий изучать трепонему «во всей красе».

8.2. Микроскопия мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе

Для исследования фиксированных (сухих) мазков используется метод окрашивания по Романовскому-Гимзе. При таком окрашивании другие виды трепонем приобретают фиолетовый оттенок, а Т. pallidum - бледно-розовый цвет.

Остальные методы исследования, такие как способ Бури, серебрение по Морозову, простой фуксиновый метод и др., не получили широкого практического применения, ввиду малой информативности.

9. Серодиагностика

Выявление антител к бледной трепонеме проводится для:

1. 1 Подтверждения клинического диагноза сифилиса;
2. 2 Установления диагноза скрытого сифилиса;
3. 3 Контроля за эффективностью проводимого лечения;
4. 4 Подтверждения выздоровления больных сифилисом;
5. 5 Профилактика сифилиса и диспансеризация населения (исследование крови определённых категорий людей, например, относящихся к группам риска).

Современные методы серодиагностики основаны на выявлении специфических и неспецифических антител разных классов.

9.1. Неспецифические серологические реакции

Лабораторное исследование крови проводится на предмет обнаружения противолипидных антител.

• Реакция Вассермана (РВ, RW)

Является классической неспецифической реакцией. В её основе лежит принцип связывания комплемента. Проводится реакция с двумя-тремя антигенами. Исполняется как для количественного, так и для качественного определения неспецифических антител.

RW ставится с кардиолипиновым и трепонемным антигеном. Последний позволяет повысить специфичность реакции и оценить состояние иммунитета больного.

При первичном сифилисе RW имеет положительное значение в конце инкубационного периода, т.е. через примерно 4 недели от начала заболевания.

При исследовании больных вторичным сифилисом положительная RW выявляется у 100% больных и у 75% больных в стадии третичного сифилиса.

Нередко, RW даёт ложноположительные результаты. Они имеют место быть при следующих физиологических состояниях:

1. 1 При других инфекциях, вызванных вирусами, бактериями, простейшими;
2. 2 При злокачественных опухолевых процессах;
3. 3 При коллагенозах;
4. 4 При беременности на поздних сроках (после 30 недели) и после родов;
5. 5 У здоровых лиц, употребляющих спиртные напитки, а также после приёма жирной пищи.
• Реакции, основанные на агглютинации кардиолипина (MP - RPR, VDRL)

Эти реакции являются методом экспресс-диагностики сифилиса. По своему существу, это микрореакции, проводимые с плазмой крови (наиболее чувствительный метод) и инактивированной сывороткой (второй по чувствительности).

Они проводятся капельным способом и требуют использование специального антигена. Этот метод серодиагностики проводится для отбора положительных проб с дальнейшим исследованием лиц с помощью специфических реакций.

9.2. Специфическая серодиагностика

В основе диагностики представлены различные методы обнаружения специфических антител.

9.2.1. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Занимает срединное положение из всех специфических методов серодиагностики. Реакция основана на принципах идентификации методом люминесцентной микроскопии флюоресцирующего комплекса, связанного с иммуноглобулином организма человека на поверхности клетки-патогена.

Флюоресцирующий комплекс состоит из человеческого глобулина и флюоресцеин тиоизоционата. Существует несколько модификаций этой реакции:

1. 1 Реакция иммунофлюоресценции с адсорбцией;
2. 2 Реакция IgМ – РИФ с адсорбцией.

9.2.2. Реакция иммобилизации Treponema pallidum (РИБТ)

Реакция РИБТ основана на особенности заражённой сыворотки крови людей обездвиживать бледные трепонемы.

В общих чертах методику можно объяснить так: в кровь больного добавляют антиген, приготовленный из сифиломы кролика и комплемент.

Иммобилизирующие антитела - это поздние антитела. Своего максимума они достигают к концу первого года болезни. Этот метод не применяется при первичном серонегативном сифилисе, считается наиболее трудоёмким.

9.2.3. Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA)

Данный метод диагностики автоматизирован. По чувствительности и специфичности сходен с реакцией иммунофлюоресценции с адсорбцией.

9.2.4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

На фоне других серологических исследований, РНГА отличается более высокой чувствительностью и специфичностью, особенно при использовании высококачественного антигена.

Принцип реакции основан на агглютинации эритроцитов, несущих на своей поверхности антигены бледной трепонемы, если к ним добавить специфические антитела. Результат РПГА будет положительным уже в конце инкубационного периода, т. е. через 3-4 недели.

Учитывая все особенности возбудителя сифилиса, можно выделить мероприятия, направленные на защиту здорового человека от заражения сифилисом.

Так как заболевание передаётся половым и контактным (бытовой сифилис) путями, стоит знать, что эффективными способами защиты являются барьерная контрацепция и соблюдение общих правил гигиены.