Кожные иммунологические пробы принцип метода. Скарификационные пробы на аллергию

Задачами диагностики аллергического заболевания являются:

Установление природы заболевания (аллергическое или неаллергическое). Нередко это можно установить на основании характерных жалоб больного и клинической картины заболевания (напр. при поллинозе, сывороточной болезни). Однако иногда возникают значительные трудности (напр, при необычных реакциях на прием лекарственных препаратов, пищевых продуктов и др.);
Необходимо дифференцировать является ли данное аллергическое заболевание является истинно аллергическим или псевдоаллергическим, то есть необходимо определить степень участия иммунных и неиммунных механизмов в развитии данного заболевания;
Важно выяснить причину данного заболевания. Знание причины вместе с установлением истинной аллергической природы процесса дает основание для дальнейшего адекватного курса лечения, назначении специфической гипосенсибилизации.

Особенностями методов обследования является широкое применение специфических диагностических тестов in vivo и лабораторных.

АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЯ АНАМНЕЗ.

Под руководством академика АМН СССР А. Д. Адо была разработана схема истории болезни, где подробно сформулированы вопросы аллергологического анамнеза. Основные задачи анамнеза:

Установить есть ли наследственная предрасположенность к аллергологическим заболеваниям;
Выявить связь между факторами окружающей среды и развитием заболевания;
Определить те группы аллергенов или единичные аллергены, которые могли бы вызвать возникновение аллергии.

Во время расспроса выясняют, какие аллергические заболевания были в прошлом или имеются в настоящее время в семье больного, как реагирует больной на введение сывороток, вакцин, прием лекарств; отмечена ли сезонность заболевания, его связь с простудой; где и когда возникают обострения, каковы жилищные и рабочие условия.

Например, для больных с аллергией на домашнюю пыль характерен «эффект элиминации» - улучшение состояния при выездах из дома.
При аллергии к некоторым производственным аллергенам характерен «эффект понедельника» - ухудшение состояния на работе после выходных дней. Связь с простудными заболеваниями выявляется обычно у больных с инфекционно-аллергической формой бронхиальной астмы, ринита . Для больных поллинозом характерна выраженная сезонность заболевания - обострение его во время цветения растений, пыльца которых является аллергеном. Наследственная предрасположенность выявляется у больных с реагиновым типом аллергических реакций.

Таким образом, уже расспрос больного позволяет определить возможные аллергены и предположить тип аллергической реакции. Эти предположения должны быть подтверждены специфическими методами обследования - кожными, провокационными и другими тестами.

КОЖНЫЕ ПРОБЫ ПРИ АЛЛЕРГИИ.

Через кожу вводят аллерген для выявления специфической сенсибилизации организма и оценки величины и характера развившегося при этом отека или воспалительной реакции. Кожные пробы (КП) ставят, как правило, в периоде ремиссии.

Различают: качественные и количественные, прямые и пассивные кожные пробы .

Качественные пробы отвечают на вопрос: есть сенсибилизация к данному аллергену или нет? Положительная проба еще не считается доказательством того, что данный аллерген является причиной этого заболевания. Причиной может оказаться другой аллерген, с которым КП не ставилась.Сенсибилизация к аллергену не всегда заканчивается развитием аллергической реакции. Поэтому у людей, практически здоровых, можно выявить существование сенсибилизации к определенным аллергенам (домашняя пыль, стрептококк и др.) без признаков развития аллергической реакции.
Аллерген можно считать причиной заболевания при совпадении положительных результатов пробы и данными анамнеза. При отсутствии такого совпадения или недостаточной выраженности КП ставят провокационные тесты.
Количественные пробы дают представление о степени сенсибилизации. Они ставятся для выявления индивидуальной чувствительности и решения вопроса о начальных дозах аллергена при проведении специфической гипосенсибилизации.
При Прямых КП аллерген вводят исследуемому больному. При Пассивных или непрямых КП сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому лицу, а затем в места введения сыворотки вводят аллерген (реакция Прауснитца - Кюстнера).

Время появления кожной реакции после воздействия аллергена и ее характер зависят от типа аллергической реакции. При реагиновом типе (I тип) реакция появляется в первые 10-20 мин. Она представляет собой волдырь округлой или неправильной формы с псевдоподиями. Цвет волдыря розоватый либо бледный с зоной артериальной гиперемии вокруг. Эта реакция получила название реакции волдырного, уртикарного или немедленного типа.
При аллергических процессах иммунокомплексного и замедленного типов (III и IV типов) кожная реакция представляет собой острое воспаление со всеми его признаками - краснотой, припухлостью, повышением температуры в зоне воспаления и болезненностью. Разница между III и IV типом заключается во времени развития и интенсивности воспаления. При III типе воспаление более выражено, оно появляется через 4-6 ч и проходит через 12-24 ч. При IV типе воспаление достигает максимального развития через 24-48 ч. Таким образом, с помощью КП можно определить тип аллергической реакции на данный аллерген.

Виды кожных проб (КП).

Аппликационные КП (син.: накожные, эпикутанные, patch-тесты).
Применяют при кожных аллергических заболеваниях на участках кожи, не затронутых повреждением. Аллергенами чаще всего служат различные химические вещества, в том числе и лекарства. Их применяют в чистом виде или в растворах в концентрациях, не вызывающих раздражения кожи у здоровых людей,. Техника постановки КП варьирует. Обычно смачивают раствором аллергена кусочек марли размером около 1 см 2 и накладывают его на кожу предплечья, живота или спины. Затем прикрывают целлофаном и закрепляют лейкопластырем. Результаты оценивают через 20 мин, 5-6 ч и 1-2 сут.

Скарификационные КП.
При этом типе КП на кожу предплечья наносят в виде капель различные аллергены на расстоянии 2-2,5 см и через каждую каплю отдельным для каждого аллергена скарификатором либо концом иглы производят повреждение эпидермиса таким образом, чтобы не повредить кровеносных сосудов. Вариантом этого вида КП является проба уколом (prick-тест) - прокалывание инъекционной иглой только эпидермиса. Скарификационные КП применяют в случаях, когда предполагают наличие реагинового типа аллергической реакции (при поллинозах, атопической форме бронхиальной астмы или ринита, отеке Квинке, крапивнице). Они выявляют только реагиновый тип аллергии. Их оценку производят через 15-20 мин.

Внутрикожные пробы.
При этом типе КП аллерген вводится внутрикожно. Эти пробы более чувствительны, чем скарификационные, но и менее специфичны. При их постановке возможны осложнения в виде органных и общих аллергических реакций. Применяются для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения, а также для определения степени чувствительности к аллергенам неинфекционной природы. Аллергены перепончатокрылых насекомых часто не дают положительных скарификационных проб, поэтому их также вводят внутрикожно, а реакция выявляется в виде системных проявлений. Тест с этими аллергенами можно отнести к провокационным тестам.

Реакция Прауснитца - Кюстнера - реакция пассивной сенсибилизации кожи.
Ее применяли для диагностики реагинового типа аллергических реакций, например при лекарственной, пищевой аллергии и др., а также для изучения свойств реагинов и определения их титра. Принцип реакции заключается во внутрикожном введении здоровому реципиенту сыворотки крови от больного и последующем введении в эти места исследуемых аллергенов. При наличии в сыворотке крови соответствующих антител у реципиента в местах ее введения развивается кожная реакция немедленного типа. В настоящее время этой реакцией пользуются редко в связи с опасностью переноса с сывороткой крови скрытой инфекции (вирус гепатита и др.), а также появлением лабораторных методов определения реагинов.

Интенсивность КП оценивают либо плюсами (от 0 до четырех плюсов), либо по диаметру папулы или воспалительного очага. Учитывая возможность развития серьезных осложнений вплоть до анафилактического шока при несоблюдении техники постановки КП, а также сложность интерпретации полученных результатов, проведение КП возможно только в аллергологических кабинетах специально обученным персоналом под наблюдением врача-аллерголога.

ПРОВОКАЦИОННЫЕ ТЕСТЫ ПРИ АЛЛЕРГИИ.

Провокационные тесты (ПТ) - способ этиологической диагностики аллергических реакций, основанный на воспроизведении этой реакции введением аллергена в шоковый орган. По виду шокового органа (т. е. того органа, поражение которого является ведущим в картине заболевания) выделяют следующие виды ПТ.

Конъюнктивальный ПТ применяют для выявления аллергенов, вызывающих развитие аллергического конъюнктивита или поллииоза, протекающего с явлениями конъюнктивита. Проводят с осторожностью из-за опасения вызвать резкую воспалительную реакцию. Аллерген закапывают в нижний конъюнктивальный мешок в концентрации, которая дала слабоположительную КП. При положительной реакции появляются слезотечение, гиперемия конъюнктивы, зуд век.

Назальный ПТ применяют при аллергических ринитах. Является наиболее безопасным. Аллерген в той же дозе, что и для конъюнкти-вального ПТ, закапывают в одну половину носа. При положительной реакции появляются чиханье, зуд в носу, ринорея, затруднение дыхания через данную половину носа. Риноскопически определяется набухание слизистой оболочки раковин, сужение носового прохода.

Ингаляционный ПТ обычно применяют при бронхиальной астме. Исследование проводят в фазе ремиссии в условиях стационара. Последнее связано с тем, что возможно развитие тяжелого приступа астмы сразу или позднее (через 4-24 ч), поэтому за больным необходимо наблюдение. Перед постановкой ПТ записывают на спирографе характер кривой форсированной ЖЕЛ (ФЖЕЛ) и вычисляют ее величину за первую секунду - ФЖЭЛ; вычисляют также коэффициент Тиффно, являющийся отношением ФЖЕЛ,; к ЖЕЛ в процентах. У здоровых людей он составляет 70-80%. Затем исследуемый вдыхает через ингалятор сначала контрольный раствор и при отсутствии реакции на него - растворы аллергена последовательно, начиная с минимальных концентраций до той, которая даст заметную реакцию. Каждый раз записывают спирограммы. Тест считается положительным при снижении ФЖЕЛ! и коэффициента Тиффно более чем на 20%. Развившийся бронхоспазм купируют бронходилататорами. При одновременном определении максимальной объемной скорости выдоха на различных участках кривой выдоха можно делать заключение о месте возникшей обструкции (мелкие или более крупные дыхательные пути). В главе 19 описан ПТ при экзогенном аллергическом альвеолите.

Холодовой ПТ применяют при холодовой крапивнице. На кожу предплечья помещают кусочек льда или бюкс со льдом на 3 мин. При положительном тесте через 5-6 мин после прекращения действия холода развивается волдырная кожная реакция, обычно соответствующая очертаниям кусочка льда или бюкса.

Тепловой ПТ применяют при тепловой крапивнице. На кожу предплечья помещают бюкс с горячей водой (40-42°С) на 10 мин. Положительная реакция характеризуется образованием волдыря.

Лейкоцитопенический ПТ применяют для этиологической диагностики пищевой и иногда лекарственной аллергии. Вначале у больного пищевой аллергией на фоне элиминационной диеты и в условиях покоя натощак дважды на протяжении часа определяют количество лейкоцитов в периферической крови. Затем, если разница между двумя исследованиями не превышает 0,3 10 у /л, дают принять пищевой продукт или лекарство. Через 30, 60 и 90 мин подсчитывают число лейкоцитов. Тест считается положительным при снижении лейкоцитов более чем на 1 10 у /л. При лекарственной аллергии следует соблюдать осторожность и не ставить тест при наличии анафилактических реакций в анамнезе. Отрицательный тест не исключает сенсибилизации к испытываемому аллергену.

Тромбоцитопенический ПТ также применяют для этиологической диагностики пищевой и иногда лекарственной аллергии. Проводят аналогично лейкоцитопеническому ПТ. Считается положительным при снижении числа тромбоцитов на 25% и более.

Экспозиционные ПТ применяют в качестве ориентировочных тестов. Исследуемого, у которого отсутствуют четкие признаки заболевания, помещают в условия, где могут быть предполагаемые аллергены, например, в аптеку, в цех, на конюшню, на мельницу, в места цветения растений и др. При наличии соответствующих аллергенов в окружающей среде развивается обострение заболевания.

С помощью провокационных тестов хорошо выявляются атопический и иммунокомплексный типы аллергических реакций, труднее обнаруживается аллергическая реакция замедленного типа.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ АЛЛЕРГИИ.

Большое значение для выявления существующей сенсибилизации имеют различные Иммунологические методы исследования. Преимущество этих методов состоит в их полной безопасности для пациентов.
Все иммунологические методы выявляют только состояние сенсибилизации, т. е. свидетельствуют о том, что у данного индивидуума когда-то уже был контакт с данным антигеном (аллергеном). Они не могут служить показателем или доказательством того, что именно на данный антиген (аллерген) разовьется аллергическая реакция, потому что для реализации аллергической реакции кроме сенсибилизации нужен еще ряд дополнительных условий.

Так как существует 4 типа сенсибилизации, для диагностических целей необходимо применять несколько методов, позволяющих оценить возможное участие всех четырех типов сенсибилизации.

Для выявления сенсибилизации можно применять следующие реакции:

радиоаллергосорбентный тест (RAST), с помощью которого определяют IgE-антитела к различным видам аллергенов;
радиоиммуносорбентный тест (RIST), позволяющий определять концентрацию общего IgE. Учитывая, что заболевания реагинового типа сопровождаются увеличением общего IgE, повышенная концентрация этого Ig явится фактором, отчасти подтверждающим участие реагинового механизма, а при отсутствии заболевания -будет служить фактором риска его развития;
реакция Шульца - Дейла - прямая и пассивная. Прямую реакцию используют обычно в эксперименте. Для этого у сенсибилизированного животного извлекают гладкомышечный орган, помещают в ванночку и налаживают запись его сокращений. Потом в ванночку добавляют аллерген и оценивают интенсивность спазма гладких мышц. Пассивную реакцию можно использовать для выявления реагинов в сыворотке крови больных людей. Для этого в ванночку помещают отрезок подвздошной кишки обезьяны, а затем добавляют сыворотку больного.
Антитела фиксируются на кишке. Последующее добавление аллергена при наличии соответствующих Ат вызывает сокращение кишки.
базофильные тесты - прямой и пассивный;
тест специфического освобождения гистамина;
тест дегрануляции тучных клеток.

методы определения циркулирующих иммунных комплексов в биопсийном материале отложившихся в тканях комплексов и анализ их состава;

определение ревматоидного фактора;

различные способы определения преципитирующих антител.

Для определения сенсибилизации наиболее подходящими являются:

методы определения лимфокинов, образующихся после контакта с аллергеном. Наиболее распространенными реакциями этого типа являются реакции торможения миграции макрофагов и образования лимфотоксина.

Метод Иммуноблотинга .

В настоящее время наиболее широко применяется Метод иммуноблотинга.
Иммуноблотинг (иммуноблот ) - высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод выявления антител к отдельным антигенам (аллергенам), Иммуноблот является высокоинформативным и достоверным методом. Данный метод исследования не имеет противопоказаний.

Aллергодиагностика Immuno CAP.

В последние годы были внедрены новые технологии для более точной тест-диагностики аллергии --- Аллергодиагностика Immuno CAP.
Называется «Аллергочип Immuno CAP».

Для тестов ImmunoCAP используются искусственные рекомбинантные аллергены, получаемые методом молекулярного клонирования. С их помощью получается результат такой точности, какой нельзя добиться традиционным методом – определяются не только мажорные компоненты, специфические для данного аллергена, но и минорные. «Аллергочип» позволяет не только точно выяснить основной аллерген, но и вещества, которые могут вызвать перекрестную аллергию.

Этот метод позволяет определить как слабые формы аллергической реакции (дерматит), так и более опасные (астма).
Определение крнцентрации IgE позволяет не только диагностировать данную аллергическую реакцию, но и прогнозировать дальнейшее возможное развитие аллергии.
Другим важным преимуществом анализов ImmunoCАР является скорость выполнения – четыре дня. Но пока что этот доступен. не для всех лабораторий.

Аллергические диагностические пробы — методы диагностики аллергии. Проводятся после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов.
Пробы выполняют вне фазы обострения заболевания и не раньше чем через 2—3 недели после перенесенной острой аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.

В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть прямыми и непрямыми.
При прямых кожных пробах аллерген вводят внутрикожно или повреждая эпидермис путем укола, царапины. При капельных и аппликационных прямых кожных пробах аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 минут (немедленная реакция), через 6—12 ч (реакция переходного типа), через 24—48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунологического механизма аллергической реакции (см. Аллергия).
Среди прямых кожных проб различных видов наиболее чувствительной является внутрикожная, затем следуют скарификационная, укол, аппликационная, капельная.

К непрямым кожным пробам относится реакция Прауснитца — Кюстнера, при которой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител на коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено.
Наиболее целесообразно выявлять антитела-реагины с помощью различных реакций иммунитета — иммуноферментного метода и др.. Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием некоторых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед аллергологическим обследованием необходимо в течение 5—7 дней воздержаться от приема этих лекарственных средств.

В диагностике аллергических болезней нельзя полностью полагаться на кожные пробы и переоценивать их результаты. Постановку кожных проб и оценку их результатов проводит только специально обученный медперсонал.

При несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии показаны провокационные пробы . Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания.
Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы .
Конъюнктивальная провокационная проба проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. Реакция считается положительной при появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век.
Назальную провокационную пробу осуществляют при аллергических ринитах и поллинозах: в одну половину носа закапывают аллерген, а в другую — контрольную жидкость. Реакция считается положительной при возникновении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда.
Ингаляционный провокационный тест применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя больной вдыхает через рот раствор аллергена. Реакция считается положительной в случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких.

К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, используемые при холодовой и тепловой крапивнице. При отсутствии четких признаков заболевания проводят экспозиционную провокационную пробу . Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в которой больной обычно находится.
Противоположной этой пробе является элиминационная проба — исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так называемую безаллергенную палату и др.
Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы применяют в диагностике пищевой аллергии и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.

Кожные пробы на аллергены – это диагностический метод выявления индивидуальной чувствительности организма вследствие введения определенных веществ и последующего анализа воспалительной реакции (появление отека, изменение цвета, болезненность). Показанием для постановки кожных проб являются данные аллергологического анамнеза, показывающие роль одного или группы аллергенов в возникновении заболевания.

Противопоказаниями к проведению кожных проб являются:

Период резкого обострения основного заболевания;

Проявление у больного или астматических симптомов;

Острые инфекции (ангина,ОРВИ, грипп);

Заболевания сердечно-сосудистой системы;

Заболевания крови;

Туберкулезный процесс;

Беременность;

Заболевания печени и почек;

Острая стадия ревматизма;

Длительная терапия гормонами;

Прием антигистаминных препаратов (зиртек, кларитин, интал).

Скарификационные кожные пробы

Место постановки скарификационных кожных проб - поверхность предплечья по средней линии — (можно ставить пробы на коже спины). Одновременно можно поставить 10-15 кожных проб с различными аллергенами. Однако во избежание осложнений, особенно при повышенной чувствительности, рекомендуется одновременно ставить скарификационные пробы только с 2-3 видами аллергенов (особенно у детей).

Методика проведения

Кожу протирают 70-процентным спиртом и дают ей подсохнуть. В нижней трети предплечья, отступив на 4-6 см от лучезапястного сустава, наносят каплю свежеприготовленного раствора гистамина (максимальный срок хранения гистамина -6 часов). Положительная реакция с гистамином свидетельствует о достаточной реактивности кожи. Выше на предплечье наносят каплю тест-контрольной жидкости (контроль отрицательной реакции). Далее по средней линии на расстоянии 5 см друг от друга наносят капли испытуемых аллергенов. Специальными скарификаторами, отдельными для каждого аллергена, наносят две царапины длиной до 6 мм через нанесенные капли гистамина, тест-контрольной жидкости и капли аллергенов так, чтобы не повредить кровеносных сосудов кожи. У детей проводится одна царапина. Через 15 минут в месте царапины капли промокают стерильными тампонами, отдельными для каждой капли.

Прик-тест

Более пригодным для исследования, чем скарификационный, в настоящее время считается тест уколом прик- тест. При этом тесте поверхностное повреждение эпителия делается тонкой, неполной иглой, кожа слегка приподнимается кончиком иглы. При появлении кровотечения тест не оценивается. У больных , вызванным высокой чувствительностью к определённым видам растений, проводят кожные пробы в виде аппликации с экстрактами этих растений.

Аппликационные кожные пробы

Аппликационные кожные пробы проводят на неповрежденных участках кожи. Смачивают кусочек бинта размером 1 см2 и прикладывают его на кожу, сверху закрывают полиэтиленом и закрепляют. Результаты анализируют через 15-20 минут, 5 часов, двое суток.

Внутрикожные пробы

В случае отрицательных результатов скарификационных проб и положительных данных аллергологического анамнеза целесообразно провести внутрикожные аллергические пробы с тем же аллергеном. Вначале в нижнюю треть поверхности предплечья на расстоянии 5 см от лучезапястного сустава вводят тест-контрольную жидкость, затем отдельными стерильными шприцами вводят 0,02 мл каждого аллергена на расстоянии 5 см друг от друга. Реакцию читают через 20 мин - реакция немедленного типа. У очень незначительного числа больных при пыльцевой аллергии могут наблюдаться замедленные реакции (через 6, 24, 48 ч).

Осложнения

При резко положительных пробах иногда наблюдается общая реакция в виде обострения основного заболевания (ринита, конъюнктивита, бронхоспазма). У больных с резко выраженной чувствительностью к определённому аллергену в очень редких случаях может возникнуть , поэтому в кабинете должен быть набор медикаментов, необходимых для оказания срочной помощи.

Ложноположительные результаты

Специфичность скарификационных и внутрикожных проб не является абсолютной. Наиболее частые причины ложноположительных результатов кожных проб - повышенная чувствительность капилляров кожи к механическому воздействию или фенолу,который является консервантом в растворах аллергенов. В таких случаях и тест-контрольная жидкость дает положительную реакцию. Во избежание этого инструменты должны быть обработаны согласно инструкциии во избежание загрязнения аллергенами, остав¬шимися от прошлого тестирования. Устранив причины ложноположительных кожных проб, легче избежать ошибок в диагностике аллергенов.

Ложноотрицательные результаты

Иногда наблюдается отрицательный результат кожной пробы на гистамин. Это объясняется слабой чувствительностью кожных покровов (сниженная реактивность кожи): такую реакцию расценивают как ложноотрицательную. Во избежание ложноотрицательных результатов за 3 дня до проведения специфической диагностики рекомендуется отменить антигистаминные препараты, адреналин, гормоны. Чувствительность кожных проб возрастает в таком порядке: скарификационная, проба уколом, внутрикожная. При ложноотрицательных кожных пробах для получения достоверных результатов тестирование повторяют трижды с интервалом в 3 дня. У некоторых больных могут отсутствовать антитела, фиксированные в кожу; у таких больных кожные реакции на эти аллергены будут отрицательными, и для также необходимо провести другие тесты (провокационные тесты, вспомогательные тесты).

Аллергические диагностические пробы - методы диагностики аллергии. Проводятся после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов. Пробы выполняют вне фазы обострения заболевания и не раньше чем через 2-3 недели после перенесенной острой аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.

В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть прямыми и непрямыми. При прямых кожных пробах аллерген вводят внутрикожно или повреждая эпидермис путем укола, царапины. При капельных и аппликационных прямых кожных пробах аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 мин (немедленная реакция), через 6-12 ч (реакция переходного типа), через 24-48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунологического механизма аллергической реакции. Среди прямых кожных проб различных видов наиболее чувствительной является внутрикожная, затем следуют скарификационная, укол, аппликационная, капельная.

К непрямым кожным пробам относится реакция Прауснитца - Кюстнера, при которой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител на коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено. Наиболее целесообразно выявлять антитела-реагины с помощью различных реакций иммунитета - иммуноферментного метода и др. Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием некоторых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед аллергологическим обследованием необходимо в течение 5-7 дней воздержаться от приема этих лекарственных средств.

При несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии показаны провокационные пробы. Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания. Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы. Конъюнктивальная провокационная проба проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. Реакция считается положительной при появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век. Назальную провокационную пробу осуществляют при аллергических ринитах и поллинозах: в одну половину носа закапывают аллерген, а в другую - контрольную жидкость. Реакция считается положительной при возникновении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда. Ингаляционный провокационный тест применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя больной вдыхает через рот раствор аллергена. Реакция считается положительной в случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких.

К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, используемые при холодовой и тепловой крапивнице. При отсутствии четких признаков заболевания проводят экспозиционную провокационную пробу. Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в которой больной обычно находится. Противоположной этой пробе является элиминационная проба - исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так называемую безаллергенную палату и др. Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы применяют в диагностике пищевой аллергии и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

1.Реакция кольцепреципитации по Асколи. В узкую пробирку с небольшим количеством неразведенной преципитирующей сыворотки, держа ее в наклонном положении, пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем Аг. экстрагированные кипячением из различного сельскохозяйственного сырья. Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин появляется серовато–белое кольцо. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного Аг. Она нашла также применение в судебной медицине для определения видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при выявлении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав Аг, участвующих в формировании преципитата.

Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vitro.

2. Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в реакции преципита ции в геле по Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный агар. Аг и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24–48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы. При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ. Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.

Кожные пробы, являясь одним из основных методов специфической диагностики, не всегда могут быть использованы. Противопоказанием к их проведению является следующее:
- 1. Период обострения аллергического заболевания;
- 2. Острые интеркуррентные заболевания ( , ОРВИ, бронхит и т. д.). В обоих случаях кожное тестирование можно проводить через 3-4 недели после их купирования;
- 3. Декомпенсированные и субкомпенсированные заболевания сердечно-сосудистой системы, печени и почек, эндокринной системы;
- 4. Ревматизм в остром и подостром периодах;
- 5. Туберкулезный процесс в стадии обострения. При последних трех группах заболеваний можно проводить кожное тестирование через 6 месяцев клинико-лабораторной ремиссии;
- 6. Злокачественное заболевание крови и опухолевые заболевания;
- 7. Психические и неврологические болезни. При последних двух группах заболеваний кожные пробы абсолютно противопоказаны;
- 8. Длительное лечение кортикостероидными гормонами. Кожное тестирование возможно не ранее чем через 3 месяца после их отмены;
- 9. Перенесенный в прошлом анафилактический шок (абсолютное противопоказание для кожного тестирования);
- 10. Период приема больным антигистаминных препаратов, антилибераторов (кетотифен, задитен, интал), ксантинов, адреномиметиков, которые могут подавлять кожную аллергическую реакцию. Данные препараты необходимо отменить за 3-5 дней до кожного тестирования.

Недоучет противопоказаний и несоблюдение основных правил постановки кожных проб может быть причиной осложнений или получения нечеткого результата (ложноположительного, ложноотрицательного), что может обусловить неправильный этиологический диагноз и неадекватную терапию.

Причинами ложноположительных результатов могут быть измененная реактивность кожи; повышенная чувствительность кожи к механическим раздражениям; повышенная чувствительность больного к фенолу, который входит в состав растворов аллергенов и тестконтрольной жидкости (во всех этих случаях отмечается положительный результат кожных проб со всеми аллергенами и разводящей жидкостью); загрязнение шприцев аллергеном, оставшимся от прошлого тестирования (поэтому инструменты должны обрабатываться согласно инструкции и необходима их маркировка); индивидуальная повышенная спонтанная деструкция тучных клеток; наличие перекрестных реакций с родственными аллергенами, например, между пыльцевыми или между пыльцевыми и пищевыми.

Причинами ложноотрицательных результатов являются сниженная реактивность кожи (о чем свидетельствует отрицательная проба с гистамином); проведение проб на фоне приема больным антигистаминных препаратов, антилибераторов, адреномиметиков и глюкокортикоидных гормонов; нарушение техники (подкожное введение аллергена вместо внутрикожного, недостаточная глубина скарификации); отсутствие антител в коже (особенно часто это наблюдается у детей первого года жизни, поскольку у них реагины слабо фиксируются в коже); отсутствие «виновного» аллергена в наборе, используемом для кожного тестирования.

При наличии противопоказаний для кожного тестирования или при получении ложноположительного и ложноотрицательного результатов может быть использована непрямая кожная проба - реакция пассивного переноса повышенной чувствительности по Прауснитцу-Кюстнеру (РПК), которая позволяет выявить потенциальные аллергены без риска для больного.

РПК проводится на коже здорового человека - реципиента. Реакция основана на выявлении реагиновых антител в сыворотке больного, которые, будучи введенными в кожу реципиента, фиксируются на тучных клетках дермы, и при последующем введении в эту зону соответствующего аллергена образующийся иммунный комплекс вызывает вследствие выделения гистамина из тучных клеток образование волдыря и гиперемии. По их размерам оценивается кожная реакция.

Показанием для проведения РПК являются: 1) все состояния больного, при которых прямое кожное тестирование противопоказано; 2) нечеткие результаты кожных проб, расхождение их с данными анамнеза; 3) дифференциальная диагностика субклинической и ложноположительного результата кожной пробы; 4) ложноотрицательный результат прямых кожных проб.